?相比之下，沉默hlf可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期(图3f-i和补充图4h)。
?因此，这些结果表明，低表达细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。
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?我们利用cck-8、集落形成和an连接素凋亡进一步研究了中的生物学功能，发现在正常培养条件下，细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响(补充图5a–c)。
?我们的结果显示，上调hlf会增加培养液的ph水平，而沉
默hlf会降低培养基的lc细胞的表型和数量(补充图5d)。
?低表达细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。
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?然而，上调的生长，而沉默细胞的锚定和悬浮生长能力(图4a和b)，表明沉默细胞在悬浮条件下的生存能力，即anoikis耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。
?事实上，昼夜节律基因的失调导致了n的代谢失调，hlf广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。
?在低血清(1)和低葡萄糖(1g/l)培养液组成的低营养条件下，lc细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4c-e）。
?hlf参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是细胞生长的前提条件。
?在低营养条件下观察n细胞hlf对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hlf表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hlf的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平(图4f–i)。
?矛盾的是，上调）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达hlf的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调hlf降低乳酸脱氢酶(ldh)的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因(。
?相反，沉默lc细胞的厌氧代谢(图4f-i和补充图6c和d)。上诉结果表明，低表达hlf促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。
?事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。
?为了进一步确定低营养条件下生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到n细胞中。如图5a所示，上调细胞ppar信号活性，抑制了nf-kb信号活性;相反，沉默hlf则产生相反的效果(图5a)。
?基于tcga的n数据集中sea)，结果显示hlf的表达水平与ppar信号呈正相关，而与nf-kb信号呈负相关。根据gsea分析，hlf表达与脂质氧化和糖酵解显著相关(补充图6f)。
?重要的是，一些证据表明，hlf通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与ppar的易位和激活，通过破坏p65与靶dna的结合，nf-kb信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。ppar信号通路由ppara、pparβ/δ和pparγ等几个家族成员组成。因此，确定参与肿瘤发生和转移的特异性ppar成员至关重要。
?首先，检测10对n组织中ppara、pparβ/δ和和h，ppara在4/10对组织中表达显著下调，pparγ在8/10对表达，而pparβ/δ在8/10对组织中表达上调。已有广泛报道称中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道pparβ/δ对起致癌作用。
?分析一致显示，hlf的上调增加了ppara和pparγ的总表达和核易位，增加了ikba的表达，但降低了磷酸化的nf-kb和p65的总水平和核水平。相反，沉默hlf则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，中激活ppara和pparγ，抑制nf-kb/p65信号通路。
?我们使用ppara激动剂非诺贝特、ppa
rγ激动剂吡格列酮和nf-kb信号抑制剂ly2409881，进一步研究了ppara/pparγ/nf-kb/细胞中的功能作用中的意义。
?我们的结果显示，在hlf沉默的细胞中，非诺贝特和吡格列酮显著上调了ppar的活性，而ly2409881则没有上。
?然而，非诺贝特、吡格列酮和ly2409881差异降低了hlf沉默细胞中nf-kb信号的活性。
?重要的是，非诺贝特、吡格列酮和ly2409881减弱了hlf下调对细胞非锚定生长和抗缺氧能力的刺激作用。相反，非诺贝特、吡格列酮和ly2409881逆转了低营养条件下细胞的促增殖（克隆生长）和抗凋亡作用
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